Фосфатаза
(фосфогидролазы моноэфиров ортофосфорной кислоты)
При определении фосфатазной активности в качестве субстрата используют различные моноэфиры фосфорной кислоты. Наиболее широко применяют водорастворимые соли фенолфталеинфосфата, фенилфосфата, глицерофосфата, α- или β-натрилфосфата и n-нитрофенилфосфата. .При их ферментативном гидролизе выделяются минеральный фосфор и органический радикал субстрата.
Методы определения фосфатазной активности почвы основаны на количественном учете неорганического фосфора (молибденовокислым аммонием и др.) или спиртовой части гидролизованного субстрата.
Метод А.Ш. Галстяна и Э.А. Арутюнян [1966]
Ход анализа. 1 г воздушно-сухой почвы помещают в колбу емкостью 50 мл, добавляют 1 мл воды, прибавляют 1 мл 1 -процентного раствора фенолфталеинфосфата натрия, 1-2 капли толуола. Колбу закрывают корковой пробкой, встряхивают и ставят в термостат на 1 ч при 30 °С. После инкубации прибавляют 45 мл воды, 2 мл 10-процентного NH4OH, взбалтывают и фильтруют через плотный фильтр. Окрашенный в розовый цвет фильтрат колориметрируют на ФЭК с синим светофильтром. В случае мутной вытяжки для просветления раствора перед аммиаком в колбу добавляют 1 мл насыщенного раствора алюмокалиевых квасцов. Контролем служит стерилизованная почва (180 0С, 3 ч) и субстрат без почвы. Количество образующегося фенолфталеина находят по калибровочной кривой, составленной с различными концентрациями спиртового раствора фенолфталеина. Найденный в фильтрате фенолфталеин пересчитывают на отщепленный фосфор. При этом исходят из того, что в фенолфталеинфосфате одна молекула фенолфталеина связана с двумя молекулами фосфорной кислоты.
Активность фосфатазы выражают в миллиграммах Р2О5 на 100 г почвы за 1 ч.
Реактивы:
1) 1-процентный водный раствор фенолфталеинфосфата натрия;
2) 10-процентный NH4OH;
3) насыщенный раствор алюмокалиевых квасцов;
4) стандартный раствор фенолфталеина: 0,01 г фенолфталеина растворяют в 60 мл этанола и объем доводят водой до 100 мл (в 1 мл 0,1 мг фенолфталеина). В мерные колбы емкостью 100 мл берут соответствующие количества стандартного раствора (в мл) с содержанием от 0,1 до 2 мг фенолфталеина и окрашивают, как описано выше.[25]
Интересное из раздела
Структура экологических систем
Существует образное выражение, что
мы живем в эпоху трех «Э»: экономика, энергетика, экология. При этом экология
как наука и образ мышления привлекает все более и более пристальное вним ...
Взаимодействие речных и сточных вод
Вода
- ценнейший природный ресурс. Она играет исключительную роль в процессах обмена
веществ, составляющих основу жизни. Огромное значение вода имеет в промышленном
и сельскохозяйственном п ...
Одомашнивание животных
Приручение диких
животных и их одомашнивание относится к глубокой древности, когда еще не было
письменности. Поэтому сведения о ходе, объеме и характере этого процесса
основываются на источ ...
